ABSTRACT
INTRODUÇÃO: as células-tronco (CT) possuem capacidade de induzir a regeneração tecidual e, portanto, apresentam um potencial terapêutico. Assim como a medula óssea e o cordão umbilical, a polpa dentária é uma das fontes disponíveis de CT. O seu fácil acesso e o fato de os dentes decíduos não serem órgãos vitais, que normalmente são descartados após a esfoliação, provêm um atrativo para testes de segurança e viabilidade terapêutica dessas células. OBJETIVOS: descrever a coleta, o isolamento e o cultivo de CT obtidas da polpa de dentes decíduos, assim como a sua caracterização por meio de citometria de fluxo e da indução da diferenciação em linhagens osteogênica e adipogênica. MÉTODOS: as CT foram obtidas de forma relativamente simples e apresentaram boa capacidade proliferativa, mesmo a partir de pouca quantidade de tecido pulpar. RESULTADOS: a análise por citometria de fluxo confirmou as características de CT mesenquimais, com baixos níveis de expressão dos antígenos CD34 e CD45, que são marcadores de células hematopoiéticas, e altos níveis de expressão dos antígenos CD105, CD166, CD90 e CD73, que são marcadores de CT mesenquimais. A plasticidade das células foi confirmada pela identificação de depósitos de cálcio nas culturas que receberam meio osteogênico, e de acúmulo lipídico intracelular nas culturas que receberam meio adipogênico. CONCLUSÕES: as CT de dentes decíduos têm um potencial promissor de aplicação em regeneração tecidual. Sendo assim, é importante difundir entre os cirurgiões-dentistas o conhecimento sobre a existência e as características dessa fonte de CT, discutindo a técnica utilizada, suas limitações e possíveis indicações.
INTRODUCTION: Stem cells (SCs) are capable of inducing tissue regeneration and are, therefore, potentially therapeutic. Similarly to bone marrow and umbilical cords, dental pulp is one of the available sources of SCs. The fact that these cells are easily accessible and that deciduous teeth are not vital organs, and are normally discarded after exfoliation, make them particularly attractive for use in safety and viability tests. OBJECTIVE: To describe the collection, isolation and culture of SCs obtained from the pulp of deciduous teeth as well as their characterization by flow cytometry, and the induction of differentiation into osteogenic and adipogenic lineages. METHODS: SCs were obtained in a relatively straightforward manner and showed good proliferative capacity, even from a small amount of pulp tissue. RESULTS: Analysis by flow cytometry confirmed the characteristics of mesenchymal SCs with low expression of CD34 and CD45 antigens, which are markers for hematopoietic cells, and high levels of expression of CD105, CD166, CD90 and CD73 antigens, which are markers for mesenchymal SCs. Cell plasticity was confirmed by identifying calcium deposits in cultures that received osteogenic medium, and intracellular lipid accumulation in adipogenic cultures that received adipogenic medium. CONCLUSIONS: SCs collected from deciduous teeth show promising potential for application in tissue regeneration. Therefore, it is important that knowledge about the existence and characteristics of this source of stem cells be disseminated among dentists and that the technique, its limitations and possible indications are highlighted and discussed.
Subject(s)
Natal Teeth , Stem Cells , Tooth, Deciduous , OrthodonticsABSTRACT
Diversos estudos têm demonstrado que a polpa dentária humana é uma fonte de células-tronco. Neste trabalho nós caracterizamos células obtidas da polpa do dente de camundongos (CTMDC) e o seu efeito terapêutico em um modelo de diabetes em camundongos. O tecido pulpar foi separado do dente incisivo e cultivado in vitro. Foi investigada a expressão de marcadores de células-tronco nas culturas celulares obtidas e a integridade genética. A diferenciação adipogênica e osteogênica foi induzida após o cultivo das células em meios específicos. Camundongos foram tratados com 80 mg/kg de estreptozotocina (ETZ) e transplantados após 10 dias com CTMDC ou salina. Os níveis de glicose no sangue, proteinúria, glicosúria e creatinina foram avaliados atmvés de dosagens bioquímicas. A migração celular para o pâncreas foi analisada por imunofluorescência. A diferenciação espontânea em adipócitos foi confirmada pela marcação com óleo vermelho, sudan black e por microscopia eletrônica. As CTMDC são aderentes ao plástico, polimórficas e altamente proliferativas. Algumas células alongadas adquiriram a capacidade de contração após 28 dias de cultura. As CTMDC apresentaram um cariótipo normal até a quinta passagem. A expressão de marcadores hematopoiéticos não foi detectada, enquanto que foi observada a expressão dos marcadores mesenquimais CD90, Sca-1, STRO-1 e CD73. Na análise da expressão de marcadores embrionários observou-se a expressão de SSEA-1 por imunofluorecência e dos fatores de transcrição REX-1 e OCT-4, mas não de NANOG, por RT-PCR. A diferenciação osteogênica e adipogênica foi observada após duas semanas de cultivo em meios específicos. Dezesseis dias após o transplante de CTMDC, camundongos com hiperglicemia induzida por ETZ apresentavam os níveis de glicose no sangue menores quando comparados com o grupo controle injetado apenas com salina. Os níveis de glicosúria, proteinúria e creatinina foram significantemente reduzidos nos camundongos transplantados com CTMDC...
Subject(s)
Animals , Mice , Adult Stem Cells/immunology , Diabetes Mellitus/metabolism , Mice , Dental Pulp/injuries , Cell- and Tissue-Based Therapy/methods , PhenotypeABSTRACT
O papel de citocinas durante a infecção experimental por L. amazonensis não é tão bem estudado quanto no modelo de infecção por L. major. Neste trabalho foi investigado o papel dos mediadores solúveis IL-4 e PGE2 no curso da infecção de camundongos BALB/c por L. amazonensis. Camundongos BALB/c IL-4 +/+ e IL-4 -/- foram infectados por diferentes inóculos de L. amazonensis e submetidos ao tratamento com indometacina, um inibidor da síntese de PGE2. A produção de IFN-y (no sobrenadante da cultura de células do linfonodo) e os níveis de anticorpos no soro foram determinados por ELlSA. Os níveis de NO sé ricos foram determinados através de seus produtos, o nitrito e o nitrato, pela reação de Griess. Apesar das lesões e da carga parasitária em camundongos BALB/c IL-4 +/+ e IL-4 -/- progredirem de forma similar quando infectados por 5 x 106 L. amazonensis, houve um aumento de esposta Th1 em camundongos IL-4 -/- como indicado pela produção elevada de IFNy e de anticorpos anti-Ieishmania IgG2a neste grupo de animais. A produção de NO foi semelhante nos dois grupos de estudo. No entanto, camundongos IL-4 -/desenvolvem lesões e carga parasitária menores que IL-4 +/+ após a infecção por 05, 104 ou 103 parasitos. Camundongos IL-4 -/- produzem cerca de 100 vezes mais NO que IL-4 +/+ após a infecção por 104 L. amazonensis. Após o tratamento com indometacina, há uma diminuição das lesões e da carga parasitária em camundongos BALB/c IL-4 +/+. Em contrapartida, apesar haver uma redução significativa no tamanho das lesões de camundongos BALB/c IL-4 -/- tratados com esta droga, nenhuma diferença na carga parasitária foi observada. As lesões dos grupos tratados com indometacina apresentavam macrófagos não vacuolados e pequenas ou ausentes áreas de necrose. A PGE2 e a IL-4 são fatores associados à susceptibilidade durante a infecção por L. amazonensis.